1、冷凍越慢越好，復(fù)蘇越快越好  氣相液氮罐

細(xì)胞冷凍越慢越好，細(xì)胞冷凍前，要有充足的時間;復(fù)蘇是相反的，速度越快越好。從液氮罐里取出來之后，迅速放在37℃水浴中，然后使勁搖，讓它盡快融化。

2、細(xì)胞凍存和復(fù)蘇注意事項(xiàng)

和液氮接觸時，要戴保護(hù)眼鏡和手套。因?yàn)閺?fù)蘇過程中搖晃，小瓶有可能會爆炸;還有，凍存液中的DMSO是有毒致癌的。所以接觸的時候一定要帶好手套。

3、凍存細(xì)胞數(shù)量要足夠

無論再怎么小心，細(xì)胞在冷凍和復(fù)蘇過程中總會死掉一批的。所以，一開始凍存細(xì)胞的數(shù)量要足夠。

4、做好標(biāo)記

把培養(yǎng)瓶放入提手，末端應(yīng)該扎有小牌，注明主人的名字，細(xì)胞名稱和凍存日期。還要在每個凍存管上寫上細(xì)胞名稱，代數(shù)和凍存日期。實(shí)驗(yàn)室的液氮罐都是公用的。每個人應(yīng)該有屬于自己的提手，會為找自己液氮罐省去好多時間。

5、細(xì)心照料

復(fù)蘇的細(xì)胞非常脆弱，需要我們的細(xì)心呵護(hù)。一切和細(xì)胞接觸的動作都要輕柔。

6、DMSO的問題

前面提到了DMSO是一種有毒致癌物質(zhì)。那么，解凍之后，應(yīng)不應(yīng)該去除凍存液中的DMSO呢? 氣相液氮罐

是不需要去除的。除了極少數(shù)特別注明的對DMSO敏感的細(xì)胞外，99%的細(xì)胞都不需要去除DMSO。解凍后的頻繁換液會慢慢去除掉DMSO的。

7、解凍前后細(xì)胞所用物質(zhì)要相同

因?yàn)槊恳环N細(xì)胞都有自己特定的，并且已經(jīng)熟悉了的生長環(huán)境。突然使用不一樣的培養(yǎng)液和血清，會造成細(xì)胞生長不良，甚至死亡。

細(xì)胞培養(yǎng)是個費(fèi)力的事情，要經(jīng)常關(guān)注。要時刻注意培養(yǎng)箱里面的細(xì)胞是不是該換液了。而掌握了有效的凍存和復(fù)蘇的技術(shù)，就可以解決這個問題。